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    achillesyao

    銅蟲 (小有名氣)

    【答案】應助回帖

    即使目的基因表達量太少,也應該會起峰,不會完全不起,很有可能是引物設計有問題,引物結合不上,或者二聚體。
    11樓2015-08-21 15:32:27
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    fallout76

    禁蟲 (小有名氣)

    本帖內容被屏蔽

    12樓2015-09-07 15:48:08
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    GJT0427gjt

    新蟲 (初入文壇)

    以我做實時定量的經驗,你應該驗證一下這對引物的特異性,引物特異性不好,溶解曲線也不好。你的循環應該設置在45個左右。也有可能加錯樣了,但是平行對照都不起峰的話,應該是引物的問題
    13樓2015-09-12 20:10:42
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    凡人凡語1

    新蟲 (小有名氣)

    【答案】應助回帖

    一般34沒出來,就已經沒戲了,你的溶解曲線可能是因為引物二聚體一類引起的
    14樓2015-09-20 22:23:22
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    workhoic

    鐵蟲 (初入文壇)

    【答案】應助回帖

    可能是引物二聚體,你可以跑下電泳,看看條帶大小
    相信自己是獲得成功的基礎!
    15樓2015-10-18 22:38:13
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    拾玖

    新蟲 (初入文壇)

    【答案】應助回帖

    首先確定你的目的基因引物沒問題   可以先用普通pcr試試  調調溫度等條件
      若果引物沒問題  你的內參CT在20左右  你的目的基因到40還沒出峰  那就是你的目的基因表達量太低了  一般來說就不用做了  如果你的內參CT也比較大 在30左右  那就很有可能是你模板太低 可以把模板提高試試
    16樓2015-10-23 17:39:54
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    O.P.C.Spirit

    金蟲 (初入文壇)

    遇見最美的她

    引物二聚物
    讀史使人明智,研究是人睿智。
    17樓2015-12-07 11:20:17
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    LXD_0001

    銀蟲 (小有名氣)

    你的模板濃度是不是太低了點?40ct以后的數據參考性不高。
    幸福是一種能力。。。。。
    18樓2016-01-09 09:37:02
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    360642352

    新蟲 (初入文壇)

    【答案】應助回帖

    目的基因拷貝數太低。另外,查看下熔解曲線的TM值,
    19樓2016-03-04 22:53:34
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    cbw2014

    新蟲 (小有名氣)

    【答案】應助回帖

    目的基因沒P出來唄~溶解曲線可能不是目的基因產物,二是非特異性擴增產物,如引物二聚體等。
    20樓2017-02-23 11:14:55
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